На практических занятиях в течение семестра студент изучает материал на микроскопических препаратах под непосредственным контролем преподавателя. Прежде чем приступить к изучению гистологических препаратов студент должен вспомнить и знать правила работы с микроскопом. Основные из них:
1. Поставить микроскоп в удобное для наблюдения положение.
2. Револьвер микроскопа должен быть замкнут на засечке слабого (8х) объектива.
3. Установить освещение при слабом объективе: для этого надо повернуть ручку освещенности в такое положение, чтобы все поле зрения микроскопа было освещено равномерно и достаточно интенсивно.
4. Положить препарат на предметный столик микроскопа так, чтобы объект находился над отверстием столика. Во избежание загрязнения препарата его надо брать двумя пальцами за грани.
5. Рассмотреть препарат при малом увеличении. Движением макровинта найти фокус, при котором препарат наиболее четко виден в поле зрения (расстояние между покровным стеклом препарата и линзой объектива при этом будет около 1 см). Передвигать препарат по столику только пальцами рук.
6. Не меняя положение тубуса, повернуть плавным движением револьвер на сильный (40х) объектив, проследив за замыканием засечки револьвера и рассмотреть препарат при этом увеличении. Студент должен помнить, что расстояние между оптикой объектива и покровным стеклом препарата составляет меньше половины миллиметра, поэтому очень легко неосторожным движением раздавить препарат и повредить объектив. При сильном увеличении необходимо пользоваться только микрометрическим винтом.
7. После окончания изучения данного препарата следует поднять тубус, перевести револьвер на слабое увеличение и только тогда снять препарат со столика микроскопа. Запрещается вытаскивать препарат из-под сильного объектива, этим можно повредить препарат и испортить объектив.
Изучение препаратов должно сопровождаться их обязательной зарисовской в альбом или тетрадь. Зарисовки необходимо выполнять простым или цветными карандашами. Каждый рисунок должен иметь название и обозначения. Надо помнить, что изготовление рисунка с препарата – не самоцель. Зарисовка дает возможность студенту лучше понять и запомнить препарат и обеспечивает более глубокое восприятие фактического материала.
В течение практических занятий студент обязан научиться на любом препарате определять изученные им эмбриологические структуры, знать их расположение, строение и функции. Эти знания проверяются на зачетном занятии, на котором студент, получив от преподавателя препарат без названия, должен его определить и разобраться во всех деталях его строения.
Читайте также:
Практическое занятие по теме
Цель занятия: Познакомить студента с морфологическими особенностями женских и мужских половых клеток (яйцеклеток и сперматозоидов), показать их сходство и различия между собой, а также другими соматическими клетками организма.
Ход занятия:
Задание 1. Гомолецитальная яйцеклетка беззубки. Срез через яичник беззубки (анадонты)
При малом увеличении найдите группы крупных, окрашенных в розовый цвет округлых яйцеклеток с ядром и ядрышком. Изучая препарат при большом увеличении необходимо обратить внимание на то, что яйцеклетка покрыта прилегающей к цитоплазме тонкой оболочкой – цитолеммой и вторичной оболочкой, отделяющейся от яйцеклетки и образующей складки. В цитоплазме обнаружить зерна желтка розового цвета. Бледно окрашенное ядро расположено эксцентрично, его оболочка хорошо выражена. В ядре четко просматривается ядрышко.
Задание 2. Телолецитальная яйцеклетка лягушки. Срез через яичник лягушки
При малом увеличении в строме яичника увидеть яйцеклетки, находящиеся на разных стадиях роста. В начале роста яйцеклетка небольшого размера, с базофильной цитоплазмой и бледным ядром. К концу периода роста клетка крупных размеров (за счет отложения в ней большого количества желтка). Цитоплазма окрашивается в розовый цвет. В яйцеклетке обнаруживается крупное бледно окрашенное ядро и большое количество ядрышек. Снаружи яйцеклетка окружена слоем фолликулярных клеток овальной формы.
Задание 3. Изучение строения куриного яйца
Задание 4. Сперматозоиды морской свинки. Мазок спермы
-
Читайте также:
При малом увеличении найти нитевидной формы бичевидные сперматозоиды. Нередко на препарате сперматозоиды склеиваются головками и, создается впечатление, что многие из них имеют несколько хвостиков. При большом увеличении рассмотреть части сперматозоида: головку, шейку, среднюю часть и хвостик. Головка имеет грушевидную форму, в ней большую часть занимает ядро. В передней части головки располагается акросома, имеющая форму темно окрашенного колпачка.
Задание 5. Сперматозоиды петуха. Мазок спермы
При малом увеличении найти участок, в котором сперматозоиды лежат по одиночке. При большом увеличении обнаружить части сперматозоида. Головка сперматозоида имеет несколько вытянутую и изогнутую головку. Сперматозоиды петуха отличаются от сперматозоидов морской свинки своими незначительными размерами, а также формой головки.
Практическое занятие по теме
Цель занятия: Познакомить студентов с особенностями строения половых желез (яичников и семенников) и развитием в них половых клеток.
Ход занятия:
Задание 1. Строение яичника кошки и развитие женских половых клеток
При малом увеличении микроскопа увидеть яичник, покрытый снаружи слоем кубических клеток. Под кубическим эпителием располагается плотная соединительная капсула – белочная оболочка. Периферическая часть яичника (под белочной оболочкой) представлена корковым веществом, а центральная – мозговым. В корковом веществе увидеть большое количество ооцитов, которые находятся на разных стадиях развития. Среди этих половых клеток найти: 1)первичный фолликулы, окруженные одним слоем плоских клеток; 2)фолликулы с кубическим эпителием; 3)вторичный фолликул с двумя слоями фолликулярных клеток; 4)третичный фолликул с образующейся полостью между фолликулярными клетками; 5)Граафов пузырек. В Граафовом пузырьке необходимо выделить: стенку, представленную зернистым слоем и соединительно-тканной оболочкой – текой; яйценосный бугорок; ооцит с оболочками; полость Граафова пузырька. Рассмотреть строение желтого тела.
При большом увеличении следует обратить внимание на строение ооцита. Цитоплазма ооцита обычно ячеистая, в центре которой находится ядро с хорошо выраженным ядрышком. В конце стадии первичного фолликула вокруг ооцита выделяется особая оболочка – оолема, окрашенная в оранжевый цвет.
- Читайте также:
Зарисовать яичник с половыми клетками, находящимися на разных стадиях развития.
Задание 2. Строение семенника и развитие мужских половых клеток. Поперечный разрез семенника крысы
При малом увеличении микроскопа найти серозную и соединительно-тканную оболочки, покрывающие снаружи семенник. В паренхиме семенника увидеть большое количество семенных канальцев, в стенках которых и осуществляется развитие мужских половых клеток (сперматозоидов). При сильном увеличении рассмотреть один из срезов стенки семенного канальца, обратив внимание на развивающиеся половые клетки – сперматогонии, сперматоциты 1 и 2 порядка, сперматиды, сперматозоиды. Особое внимание обратить на изменение формы и размеров клеток и их ядер в разные периоды сперматогенеза. В заключение следует познакомиться с клетками Сертоли.
Зарисовать часть стенки канальца с развивающимися мужскими половыми клетками.
Практическое занятие по теме
Цель занятия: Познакомить студентов с морфологическими изменениями, наблюдаемыми в женской половой клетке при мейозе и оплодотворении.
Ход занятия:
Задание 1. Оплодотворение яйца лошадиной аскариды
При малом увеличении микроскопа найти округлой формы яйцо, окрашенное в синий цвет. Между яйцеклетками увидеть большое количество сперматозоидов клиновидной формы, часть которых проникает или проникла в яйцеклетку. При сильном увеличении в цитоплазме яйца рассмотреть проникшую мужскую половую клетку с маленьким ядром и ядро женской половой клетки. Следует помнить, что у аскариды сперматозоиды проникают в ядро до начала ее созревания.
- Читайте также:
Зарисовать отдельную яйцеклетку с проникшим в нее сперматозоидом.
Задание 2. Деления созревания в яйцах лошадиной аскариды
В полости яйцевода при малом увеличении микроскопа увидеть большое количество яиц, окруженных толстой оболочкой. Убедиться, что до первого деления созревания эта оболочка вплотную прилегает к яйцеклетке. При сильном увеличении найти яйцо с образовавшимся веретеном первого деления созревания. Обратить внимание на отделение первого полярного (направительного) тельца и начало образования перивителлинового пространства. После этого, передвигая препарат, найти и рассмотреть яйцо с образовавшимся веретеном второго деления созревания. Необходимо сосредоточить свое внимание на образовавшемся перивителлиновом пространстве и отделившимся втором полярном тельце. В результате второго деления созревания образуется зрелая яйцеклетка.
Зарисовать ооциты 1, 2 порядков и зрелую яйцеклетку с направительными тельцами и перивителлиновым пространством.
Задание 3.Синкарион у лошадиной аскариды (слияние пронуклеусов)
При слабом увеличении микроскопа в полости матки найти яйца, которые находятся на стадии слияния пронуклеусов. Рассматривая с большим увеличением зиготу с двумя пронуклеусами, следует помнить, что один пронуклеус представлен женским ядром, другой – ядром сперматозоида (после завершения периода созревания пронуклеусы имеют строение обычных интерфазных ядер). Обратить внимание на перивителлиновое пространство и оболочку зиготы. Найти и рассмотреть первое направительное тельце, прижатое к внутренней поверхности оболочки, а также второе направительное тельце, расположенное на поверхности зиготы. Зарисовать зиготу в состоянии синкариона.
Задание 4. Дробление зиготы аскариды
При слабом увеличении микроскопа найти на срезе зиготу на стадии метафазы. На этой стадии хромосомы располагаются по экватору. Следует помнить, что если зигота разрезана по экватору, образуется фигура материнской звезды, а если меридионально, то получается фигура экваториальной пластинки. На полюсах видны центриоли, окруженные лучистой сферой. Между центриолями протягиваются нити центрального веретена. Передвигая препарат, найти зиготу на стадии анафазы. Убедиться, что на этой стадии хромосомы начинают отходить в направлении центриолей. В начальной телофазе увидеть появление перетяжки клетки.
Зарисовать зиготу на стадии метафазы, анафазы и телофазы, обозначив выше указанные структуры.
Последнее изменение этой страницы: 2016-08-06; Нарушение авторского права страницы
На рис. 10 представлена схема, иллюстрирующая проникновение сперматозоида в яйцеклетку. Цитоплазма яйцеклетки сильно вакуолизирована. В центре находится ядро с 4 хромосомами (диплоидный набор). В сперматозоиде уже гаплоидный набор с 2 хромосомами.
Все последующие препараты необходимо рассматривать при большом увеличении микроскопа.
Препарат 2. Матка аскариды (поперечный срез): выделение первого редукционного тельца (рис. 11, а, б)
После внедрения сперматозоида в яйцеклетку в ней начинаются деления созревания (мейоз), сопровождающиеся выделением редукционных телец.
Снаружи матка покрыта покровными фолликулярными клетками, а полость ее заполнена оплодотворенными ооцитами. Цитоплазма ооцита сильно вакуолизирована. Женское ядро уходит к анимальному полюсу клетки и формирует там веретено первого деления созревания. После прохождения конъюгации и репликации ДНК в ядре находятся 2 хромосомы, состоящие из 4 хроматид (тетрады). Оболочка оплодотворения еще не отошла от мембраны ооцита. Сперматическое ядро набухает, в нем еще виден хроматин.
Препарат 3. Матка аскариды (поперечный срез): выделение второго редукционного тельца и образование оболочки оплодотворения (рис. 11, в, г)
На препарате видно, что образовалось перивителлиновое пространство, и оболочка оплодотворения отошла от зиготы. Зигота имеет мелкозернистую цитоплазму, в которой лежит деконденсированная головка спермия. На этом этапе деконденсация почти завершилась: темная головка сперматозоида почти не видна, а область хроматина мужского ядра большего диаметра и более плотная, чем на предыдущем препарате. На периферии зиготы видно веретено второго деления созревания. Каждая хромосома состоит уже из 2 хроматид (диада). На мембране ооцита располагается первое редукционное тельце. Кроме того, на препарате различима тонкая, но темная оболочка, в виде ободка, покрывающего оболочку оплодотворения. Она называется кутикулой. Это третичная оболочка, она формируется после оплодотворения и секретируется клетками матки. Позднее эта оболочка становится более толстой и прочной. Ее функция – защита эмбриона аскариды от воздействия неблагоприятных факторов внешней среды.
Препарат 4. Матка аскариды (поперечный срез): стадия пронуклеусов и первое деление дробления(рис. 12, а)
Последующие этапы процесса оплодотворения (стадию пронуклеусов, веретено деления зиготы, стадию двух бластомеров) можно найти на одном препарате.
Стадия двух пронуклеусов. После завершения второго редукционного деления гаплоидные родительские геномы покрываются ядерными оболочками – формируются мужской и женский пронуклеусы, которые начинают сближаться, двигаясь по цитоплазме зиготы по сложной траектории. На большом увеличении в центре клетки видны два пронуклеуса. Часто внутри пронуклеусов виден ядерный материал. Он находится в спирализованном состоянии. Перивителлиновое пространство увеличилось в размерах значительно, на яйцеклетке и на внутренней стороне оболочки оплодотворения просматриваются два редукционных тельца. Оболочка оплодотворения покрыта толстой кутикулой.
Веретено деления зиготы(рис. 12, А). Сперматозоид вносит в яйцеклетку не только свое ядро, но и центриоль, которая делится и формирует веретено деления зиготы. В центре клетки часто видна метафазная пластинка веретена деления зиготы и даже само веретено. Оно образовано микротрубочками, отходящими от центриолей. Каждая хромосома состоит из двух хроматид – всего 4 хроматиды.
Яйцеклетки и сперматозоиды вырабатывают химические вещества – гамоны (гормоны гамет), которые участвуют в обеспечении их сближения и взаимодействия. Яйцеклетки вырабатывают гиногамоны Ι и гиногамоны ΙΙ. Гиногамоны I – низкомолекулярные вещества небелковой природы, они активируют движения сперматозоидов. Гиногамоны ΙΙ (фертилизины) – видоспецифические вещества белковой природы, которые вызывают склеивание сперматозоидов путем реакции с выделяемым мужскими половыми клетками андрогамоном ΙΙ (антифертилизином). Сперматозоиды выделяют андрогамон I – вещество небелковой природы, являющееся антагонистом гиногамона Ι и подавляющее подвижность сперматозоидов. Сперматозоиды выделяют спермолизины, относящиеся к протеолитическим ферментам, вызывающим растворение оболочек яйцеклетки.
Контактное взаимодействие гамет
При контакте сперматозоида с оболочкой яйцеклетки происходит акросомная реакция сперматозоидов. Последовательные стадии этой реакции: наружная мембрана, покрывающая акросому, разрывается и высвобождаются вещества акросомы (спермолизины), которые быстро растворяют яйцевые оболочки в месте контакта со спермием. Сперматозоид выбрасывает акросомную нить,вступающую в контакт с плазматической мембраной яйцеклетки. Плазматические мембраны в месте контакта яйца и акросомной нити сперматозоида сливаются, образуется цитоплазматический мостик и происходит плазмогамия – объединение цитоплазмы обеих гамет. По цитоплазматическому мостику в цитоплазму яйца переходит ядро и центриоль сперматозоида. Акросомная реакция завершается встраиванием мембраны сперматозоида в мембрану яйцеклетки. При контакте сперматозоида с яйцеклеткой происходит реакция активациияйцеклетки. Она связана со сложными структурными и физико-химическими изменениями яйцеклетки. Эти изменения сопровождаются видимыми макроморфологическими перестройками – кортикальной реакцией.
Между желточной оболочкой и плазматической мембраной возникает перивителлиновое пространство, образуется оболочка оплодотворения.
Сингамия
Вхождение сперматозоида в яйцо у разных животных совершается на неодинаковых этапах оогенеза. Процесс слияния ядер происходит после прохождения обоих делений созревания. В период завершения женского мейоза ядро сперматозоида преобразуется в мужской пронуклеус, ядро яйцеклетки – в женский пронуклеус. Конечная стадия сближения пронуклеусов – образование метафазной пластинки деления зиготы.
Препараты
№1. Оплодотворение у лошадиной аскариды (Рис. 7).
Препарат представляет собой группу яйцеклеток аскариды на разных стадиях оплодотворения. Имеются неоплодотворенные яйцеклетки, в которых одно ядро, мелкозернистая цитоплазма, около оболочки – сперматозоиды. Есть яйцеклетки, в которых наблюдается момент внедрения сперматозоида в яйцо. Имеются оплодотворенные яйцеклетки с двумя ядрами: одно более рыхлое, это женское ядро в стадии лептонемы профазы, другое более компактное, нередко еще сохраняющее треугольную форму – это мужское ядро. В отдельных яйцеклетках между наружным краем цитоплазмы и оболочкой сохраняются редукционное тельце.
Зарисовать при большом увеличении несколько яйцеклеток на разных стадиях оплодотворения и обозначить: 1 – ядро яйцеклетки; 2 – цитоплазму; 3 –оболочку; 4 – сперматозоид около яйцеклетки; 5 – внедряющийся сперматозоид; 6 – женский пронуклеус в стадии лептонемы профазы; 7 – мужское ядро.
Рис. 7. Оплодотворение у лошадиной аскариды.
Обозначения по тексту.
№2. Деление созревания яйцеклетки лошадиной аскариды (Рис. 8).
Препарат представляет собой поперечный срез матки аскариды, набитой яйцеклетками, окруженными толстыми оболочками. Некоторые яйцеклетки еще не оплодотворены, в другие уже проникли сперматозоиды. Ядро сперматозоидов набухает, разрыхляется, увеличивается в объеме и превращается в мужской пронуклеус. Рассмотрим яйцеклетки на стадии 1 деления созревания (редукционного), в ядре которых наблюдается стадия лептонемы профазы. В отдельных яйцеклетках в ядре наблюдается конъюгация хромосом – стадия зигонемы профазы. Во всех яйцеклетках хорошо заметно перивителлиновое пространство и редукционные тельца.
Зарисовать при большом увеличении несколько яйцеклеток на разных стадиях деления созревания и обозначить: 1 – женский пронуклеус; 2 – мужской пронуклеус; 3 – перивителлиновое пространство; 4 – первое редукционное тельце; 5 – второе редукционное тельце; 6 – лептонема профазы; 7 – зигонема профазы (коньюгация хромосом).
Рис. 8. Деление созревания яйцеклетки лошадиной аскариды.
Обозначения по тексту.
№3. Синкарион у лошадиной аскариды (Рис. 9).
Препарат представляет собой поперечный срез матки аскариды, заполненной яйцеклетками. Рассмотрим яйцеклетки, в которых женский и мужской пронуклеусы сближаются. В других яйцеклетках наблюдается слияние (сингамия) пронуклеусов и образование синкариона (соядрие). В отдельных яйцеклетках мы различаем соприкасающиеся ядра, в других оболочка ядер уже растворилась и хромосомы объединились в общую группу. Во всех яйцеклетках хорошо заметно перивителлиновое пространство и редукционные тельца.
Зарисовать при большом увеличении несколько яйцеклеток на разных стадиях сближения пронуклеуса и обозначить: 1 – пронуклеусы; 2 –перивителлиновое пространство; 3 – первое редукционное тельце; 4 – второе редукционное тельце; 5 – синкарион.
Рис. 9. Синкарион у лошадиной аскариды.
Обозначения по тексту.
№4. Дробление яйцеклетки аскариды (Рис. 10).
В поперечно разрезанной матке видны яйцеклетки, в большей части которых произошло оплодотворение. В перивителлиновом пространстве можно увидеть остатки одного или двух редукционных телец. Не все зиготы находятся на одинаковых стадиях развития: среди них встречаются одноклеточные с двумя пронуклеусами, а также с одним ядром, в котором видно веретено деления. Имеются зиготы, состоящие из 2-х, 4-х и более бластомеров, на разных стадиях митоза. Дробление у аскариды протекает по типу полного, равномерного и радиального. Если в зиготе видно нечетное количество бластомеров (3, 5 или больше), значит некоторые из них не попали в срез.
Зарисовать при большом увеличении несколько зародышей: с одним ядром и веретеном деления зиготы и ряд других, состоящих из нескольких бластомеров. Обозначить: 1 – метафаза; 2 – анафаза; 3 – бластомеры; 4 – редукционное тельце; 5 – перивителлиновое пространство.
Обозначения по тексту.
Занятие 4
Дробление. Гаструляция.
Последнее изменение этой страницы: 2016-06-22; Нарушение авторского права страницы
На малом увеличении в матке аскариды видно значительное количество яйцеклеток. Необходимо найти и зарисовать яйцеклетки, в которых завершился процесс делений созревания. Их цитоплазма содержит два пронуклеуса – ядра мужской и женской половых клеток с гаплоидным набором хромосом. В некоторых яйцеклетках происходит процесс митотического деления, который можно различить по наличию хромосомных структур характерных для различных стадии деления.
Рис. 6 Синкарион в яйцеклетах Фото №3 Синкарион в яйцеклетке
лошадиной аскариды: аскариды: 1 – зигота, 2 –женский
1 – соприкасающиеся пронуклеусы, 3 – мужской пронуклеус.
2 – зигота с синкарионом, 3 – первое редукционное тельце,
4 –околожелточное пространство,
5 – второе редукционное тельце, 6 – эпителий матки,
7 – митоз в оплодотворенной яйцеклетке.
Вопросы для самоконтроля:
1. Перечислите функции вспомогательных клеток №2.
2. Что такое фолликул. Какие изменения он претерпевает в ходе развития?
3. Когда формируется желтое тело и какова его роль?
4. Рассмотрите фото и дайте сравнительную характеристику клеток, находящихся на разных стадиях сперматогенеза (сперматиды и сперматоциты первого порядка).
5. В чем заключается акросомная реакция сперматозоида?
6. Что такое синкарион?
7. Дайте характеристику партеногенеза и приведите примеры.
ЗАНЯТИЕ 1.2.3.
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:
Отключите adBlock! и обновите страницу (F5) очень нужно
Тема 3. ОПЛОДОТВОРЕНИЕ
Цель занятия: изучение основных этапов процесса оплодотворения на примере лошадиной аскариды.
Яйца аскариды представляют собой очень удобный объект для изучения процесса оплодотворения и ранних этапов развития благодаря крупным размерам и небольшому числу хромосом (4 в диплоидном наборе). При окрашивании железным гематоксилином это позволяет наблюдать четкие картины изменений ядерного материала в ходе мейотических делений и далее при первом делении дробления зиготы.
Встреча гамет у аскариды происходит внутри половых путей самки (внутреннее оплодотворение). Вхождение сперматозоида в яйцеклетку у аскариды (а также у птиц и некоторых млекопитающих) происходит еще до делений созревания, на стадии ооцита I порядка. После проникновения сперматозоида внутрь появляется оболочка оплодотворения, препятствующая полиспермии. При раннем проникновении в яйцеклетку материал сперматозоида пребывает в ней в состоянии покоя до тех пор, пока не завершится мейоз.
Оплодотворенные ооциты от момента проникновения сперматозоида и до первых делений дробления находятся в матке аскариды, причем более поздние стадии – ближе к переднему концу матки.
Препараты для изучения процесса оплодотворения и дробления обычно представляют собой поперечные срезы матки аскариды (за исключением препарата 7). Общую картину среза следует изучить при малом и среднем увеличении, структуру зиготы – при большом увеличении.
Препарат 6. Деления созревания яйцеклеток аскариды. Железный гематоксилин.
Ооцит I порядка. Первое деление созревания. После попадания в яйцеклетку ядро сперматозоида быстро набухает и увеличивается в объеме. В области расположения головки сперматозоида (обычно ближе к центру зиготы) можно различить темное пятно – это та область ядра, ДНК которой еще не подверглась деконденсации; иногда в ней просматриваются 2 хромосомы. Вокруг этого участка располагается ореол уже деконденсированного материала. На периферии зиготы при удачном прохождении среза может быть видно веретено первого деления созревания в виде темного пятнышка, иногда видны хромосомы в виде двух тетрад, образованных попарно сближенными гомологами. На этом этапе созревания оболочка ооцита еще не отошла от плазматической мембраны (т. е. оболочка оплодотворения еще не сформирована), а пенистая цитоплазма содержит много относительно крупных вакуолей.
Ооцит II порядка. Второе деление созревания. На данном этапе оплодотворения деконденсация почти завершилась: темное пятно головки спермия уже не видно, а область хроматина мужского ядра большего диаметра и более плотная, чем на предыдущем препарате. На периферии по-прежнему видно веретено деления, но это уже веретено второго деления созревания. Иногда в его области просматриваются 2 хромосомы. На этом этапе уже образовалось перивителлиновое пространство, и оболочка оплодотворения уже отошла от плазматической мембраны зиготы. К оболочке оплодотворения прилегает первое редукционной тельце (полоцит) в виде темного мелкого образования. Его положение указывает на то, что первое мейотическое деление у аскариды заканчивается еще до отхождения оболочки оплодотворения. Цитоплазма зиготы на этом этапе содержит многочисленные мелкие вакуоли.
Кроме того, на препарате различим тонкий темный ободок, покрывающий оболочку оплодотворения снаружи. Это третичная оболочка – кутикула, которую секретируют клетки матки после оплодотворения. Сначала она тонкая, но на поздних этапах оплодотворения становится толстой и бугристой.
Рассмотреть при малом увеличении (х поперечный срез матки аскариды и зарисовать его фрагмент (сектор примерно 1/3 – ¼ от общей площади среза).
Рис 1. Фрагмент поперечного среза матки лошадиной аскариды. Железный гематоксилин. Об. х 8.
Обозначения: 1 – колбовидные фолликулярные клетки стенки матки;
При большом увеличении (х 40) найти зиготы в состоянии первого и второго мейотических делений и зарисовать их, обратив внимание на морфологические различия.
Рис. 2. Первое деление созревания яйцеклетки лошадиной аскариды. Железный гематоксилин. Об. х 40.
Обозначения: 1 – конденсированная часть ядра сперматозоида;
2 – деконденсированная часть ядра сперматозоида;
3 – веретено первого деления созревания ядра яйцеклетки (если видно);
4 – крупные вакуоли;
5 – желточная (первичная) оболочка;
6 – цитоплазматическая мембрана.
Рис 3. Второе деление созревания яйцеклетки лошадиной аскариды. Железный гематоксилин. Об. х 40.
Обозначения: 1 – полностью деконденсированное ядро сперматозоида;
2 – веретено второго деления созревания яйцеклетки (если видно);
3 – первое редукционное тельце;
4 – мелкие вакуоли;
5 – цитоплазматическая мембрана;
6 – перивителлиновое пространство;
7 – оболочка оплодотворения (желточная);
8 – кутикулярная оболочка.
Примечание: Первое деление созревания (реже второе) можно также наблюдать на препарате 7. Оплодотворение у лошадиной аскариды. Отличия от предыдущего препарата заключаются в другой окраске (гематоксилином-эозином), а также в том, что на нем яйцеклетки и сперматозоиды лежат свободно (вне матки) и в небольших количествах. Однако, сохранность этих препаратов и четкость наблюдаемой картины состояния содержимого зиготы несколько хуже.
Препарат 8. Синкарион. Поперечный срез матки лошадиной аскариды. Железный гематоксилин.
Этот препарат, как и 6-й, представляет собой поперечный срез матки аскариды, но расположенный ближе к влагалищу. На нем, как правило, можно наблюдать последующие этапы процесса оплодотворения (стадию пронуклеусов, метафазу, анафазу и телофазу первого деления дробления, стадию двух бластомеров).
Метафаза первого деления дробления. На срезе матки следует найти зиготу, срез которой прошел через оба полюса веретена первого деления дробления. Оболочки пронуклеусов к моменту соприкосновения разрушаются и хромосомы объединяются в единую группу. Стадия метафазы легко идентифицируется по наличию метафазной пластинки, образованной хромосомами обоих пронуклеусов, которые выстроились по экватору веретена. Всего хромосом в диплоидном наборе 4, и каждая к этому моменту состоит из двух хроматид. Центриоли и их лучистые сияния из микротрубочек располагаются на периферии зиготы друг напротив друга в виде довольно темных пятнышек расплывчатой формы, к которым сходятся отчетливо видные нити веретена деления. Состояние оболочек и редукционных телец прежнее.
Анафаза и телофаза первого деления дробления.
Анафаза, в силу кратковременности существования встречается редко. В этой фазе сестринские хромосомы расходятся к противоположным полюсам зиготы. В конце анафазы в центральной части клетки снаружи появляется борозда, которая постепенно углубляется и в телофазе делит клетку на две дочерние. Одновременно идет реконструкция дочерних ядер (деконденсируются хромосомы, образуются ядрышко и ядерная оболочка).
Стадия образования двух бластомеров. Эту стадию нужно уметь отличать от поздней телофазы. На двуклеточной стадии бластомеры полностью отделены друг от друга и часто лежат в разных оптических плоскостях, а на стадии телофазы обычно хорошо видны борозда дробления и контрактильное кольцо.
Найти на препарате зиготу на стадии пронуклеусов и зарисовать ее при большом увеличении.
Рис. 4. Стадия пронуклеусов ( синкарион) у лошадиной аскариды. Железный гематоксилин. Об. х 40.
Обозначения: 1 –третичная кутикулярная оболочка;
2 – оболочка оплодотворения;
3 – перивителлиновое пространство;
4 – плазматическая мембрана;
6 – первое редукционное тельце (если есть);
7 – второе редукционное тельце (если есть).
При наличии достаточного времени следует найти и зарисовать метафазу, анафазу и телофазу первого деления дробления (структуры, которые необходимо обозначить, выделены в тексте курсивом).
По каким признакам можно отличить первое деление созревания яйцеклетки аскариды? По каким признакам можно отличить второе деление созревания яйцеклетки аскариды? Как выглядит стадия пронуклеусов у лошадиной аскариды? Каково происхождение кутикулы у яйца аскариды? К какому типу яйцевых оболочек она относится?
Дробление яйца лошадиной аскариды.
Окраска железным гематоксилином.
Синкарион в яйцеклетках лошадиной аскариды. Матка аскариды.
Окраска железным гематоксилином.
Препарат представляет собой срез матки аскариды, содержащей оплодотворенные яйца.
При малом увеличении в препарате видны эпителий матки и много женских половых клеток. В клетках хорошо видны оболочки и между оболочками и клетками околожелточные пространства. При большом увеличении микроскопа следует рассмотреть оболочки
яйцеклеток и найти примкнувшие к ним первые редукционные тельца. Передвигая препарат и рассматривая другие клетки, необходимо найти вторые редукционные тельца.
В яйцеклетках найти ядра. В некоторых двуядерных клетках ядра рас положены на расстоянии друг от друга.
1— ооцит I порядка;
2— ооцит II порядка;
3— оболочка оплодотворения;
4— веретено 2-го деления созревания;
5— цитоплазма ооцита с желточными включениями и вакуолями;
6— деконденсирующаяся головка спермия;
7— веретено 1-го деления созревания;
8— первое полярное тельце;
9— покровные фолликулярные клетки матки;
10— избыточные спермин
Они представляют собой два пронуклеуса –мужской и женский, которые невозможно
отличить друг от друга. В других дву ядерных клетках пронуклеусы соприкасаются между собой и в них видны хромосомы. В отдельных клетках можно найти слившиеся пронуклеусы, образовавшие диплоидное ядро зиготы –синкарион.Наконец, есть клетки, в которых происходит процесс митоза –деления ядра зиготы, которым начинается дробление.
Читайте также:
